简论高效液相色谱法与荧光偏振免疫法在抗癫痫药血清浓度测定中相关性比较

更新时间：2024-02-03 作者：用户投稿原创标记本站原创
[摘要] 目的 探究HPLC与FPIA两种策略在抗癫痫药血清浓度测定中的相关性。 策略 采集本院收治的经苯妥英钠（PT）、（PB）、卡马西平（CBZ）治疗的103例癫痫患者血清，分别采用高效液相色谱法、荧光偏振免疫法测定其血药浓度并进行线性回归分析。 结果 所得的线性回归方程为YPT=-1.421+1.141X（r=0.963）；YPB= -0.128+0.956X（r=0.949） ；YCBZ=0.183+0.954X（r=0.944），且两种策略测得的值呈线性相关；经配对t检验后，两者差异有统计学作用（P>0.05）。 结论 高效液相色谱法与荧光偏振免疫法两种策略测定抗癫痫药血清浓度具有相关性。采用HPLC法和FPIA法进行CBZ、PT、PB的血清浓度测定各有利弊，须结合检测药物种类数目、受检人数等合理选择监测方式
[关键词] 高效液相色谱法；荧光偏振免疫法；抗癫痫药
[] B [文章编号] 2095-0616（2013）21-61-03
癫痫（epilepsy）是多种理由导致的脑部神经元高度同步化异常放电的临床综合症[1]。癫痫的治疗仍以药物为主，临床常用的有苯妥英钠（PT）、（PB）、卡马西平（CBZ）等。但由于这些药物常有不同程度的不良反应，且较容易发生中毒症状。因此需监测抗癫痫药物的血清浓度，进而保证使用安全。目前，高效液相色谱法（HPLC）与荧光偏振免疫法（FPIA）是最常用的监测血药浓度策略[2]。为了探究HPLC与FPIA在测定常用抗癫痫药物血清浓度的相关性，本资料对其进行实验研究并报道如下。
1 资料与策略
1.1 一般资料
研究对象为2012年6月～2012年12月在我院神经内科治疗的103例癫痫患者，按照使用抗癫痫药物的不同，分为PT组31例，CBZ组43例，PB组29例。3组间患者的性别、年龄等一般情况比较差异无统计学作用。癫痫的诊断与分类按照1989年国际抗癫痫联盟分类标准进行[3]。所有患者均在服药前抽取静脉血2～3mL，将分离后的血清分成2份，分别用HPLC法与FPIA法测定其药物的稳态谷浓度。
1.2 仪器与试剂
使用仪器主要包括Intergral-100 HPLC系统（美国Perkin-Elmer公司），TDxFLx荧光偏振免疫分析仪（美国雅培公司），LG10-3A高速冷冻离心机（北京医用离心机厂），xw-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂），AG285电子分析天平（瑞士梅勒公司）等。
检验所用的PT、PB、CBZ均由中国药品生物制品检定所提供，内标物采用自制。和甲醇分别为分析纯和色谱纯甲醇；FPIA法均使用雅培公司所生产的配套试剂盒、标准曲线盒、质控盒。
1.3 HPLC
1.3.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS柱（250mm× 4.6mm，5μm），流动相采用甲醇-水（60︰40），柱温30℃，检测波长254nm，流速为1.0mL/min，进样量20μL。
标准储备液制备：采用电子分析天平称取CBZ、PT、PB及，用色谱纯甲醇作为溶剂制备成浓度为100μg/mL的内标液及标准贮备液，放入4℃冰箱内贮存。
1.3.2 血清样品处理 取0.1mL血清样品至10mL离心管内，加15μL内标液漩涡混合2min；加入2mL后再旋涡混合5min。然后在1500r/min转速下离心5min，将上清液1.5mL置于45℃水浴中，并于N2流下挥干，所得的残渣加入流动相150μL后旋涡混合5min，再在4000r/min转速下离心5min，取20μL上清液进样分析。相同色谱条件下，待测物的分析不受空白血清提取物的干扰，得到PB、PT、CBZ及内标液的保留时间依次为4.2、5.4、6.3、7.8min。
1.3.3 制备标准曲线 用电子分析天平量取适当CBZ、PT、PB的标准制备液（浓度100μg/ml），放入N2流及45℃水浴中挥干，再精密加入空白血清0.1mL、内标液15μL，进行2min漩涡混合，按照1.3.2中的方式测定。线性回归分析时，横坐标X为药物浓度，纵坐标Y为药物与内标峰面积之比，得到回归方程为YCBZ=0.0009+0.1054X（r=0.9993），线性范围1.4～23.0μg/mL；YPT=0.0112+0.0189X（r=0.9992），线性范围5.5～39.0μg/mL；YPB=0.0048+0.0169X（r=0.9995），线性范围5.5～61.0μg/mL。
1.3.4 回收率及精密度试验 分别制备低、中、高3种浓度的CBZ、PT、PB含药血清，精密量取内标液15μL后旋涡混合2min。按照上述策略进行测定，将测得的药物峰面积与内标峰面积之比（Y）代入回归方程，计算出测得量（X），并计算回收率（测得量与加入量之比）。每种浓度在1d内测定6次，得到日内相对标准差；连续测定6d来计算日间相对标准差，结果详见表1。
1.3.5 测定稳定性与灵敏度 在室温25℃以下的条件中，测定低中高不同浓度的含药血清，结果显示药物浓度在6h内保持稳定；含药血清经冷冻-融化3次之后，测定结果显示含药血清的药物浓度也保持稳定；于-30℃温度下将不同浓度的含高效液相色谱法与荧光偏振免疫法在抗癫痫药血清浓度测定中的相关性比较由专注毕业论文与职称论文的www.808so.com提供,转载请保留.药血清放置1个月，测定结果也显示血清能保持稳定。按照3︰1的信噪比进行计算，CBZ、PB、PT的最低检测浓度依次为0.2、1.0、1.0μg/mL。
1.4 FPIA法
用荧光偏振免疫分析仪来测定血清浓度，主要步骤为：量取患者血清150μL，注入专用的样品杯后按照使用手册进行操作，用配套的标准曲线盒、质控盒制备标准曲线并作随机质控，分析仪进行自行取样、分析测定。见表2。1.5 统计学策略
HPLC法与FPIA法结果比较，运用SPSS13.0进行数据处理，采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 相关性分析
用线性回归进行比较，横坐标X为HPLC法的测定结果，纵坐标Y为FPIA法的测定结果，得到回归方程为YCBZ=0.183+0.954X（r=0.944）；YPT=-1.421+1.141X（r=0.963）；YPB=-0.128+0.956X（r=0.949）。
2.2 配对t检验
将CBZ、PT、PB的两种测定策略结果进行配对t检验，结果显示这两种策略所测得的值均差异无统计学作用（P>0.05）。见表3。
3 讨论
当前，HPLC及FPIA都已在国内医院或临床药学实验室广泛应用。在本资料中，HPLC法和FPIA法测定CBZ、PT、PB血清浓度结果的呈线性相关；对两者监测的数据进行配对t检验后发现，这两种策略监测的准确性方面没有明显差异。但是作为当前监测血药浓度的最常用策略，两者仍存在着一定的优劣。
HPLC法的专一性较FPIA法好，具有准确、灵敏、重现性好、专属性强的优点。由于高效的分离能力，HPLC法能同时测定多种药物及其代谢产物的浓度，故而在很多实验室中多采用HPLC法来对照比较其他监测策略的合理及准确程度[4-5]。虽然HPLC法不必依赖于商品化的试剂盒，但所用样品需进行预处理[6]，周期较长且技术难度较大，对操作者要求较高。
FPIA法具有监测周期短、自动化程度高、操作简便等优点，因此适用于急诊检查与单一药物的批量分析测定。但由于不能同时测定多种药物，测定品种受试剂种类限制，且试剂昂贵，故而专属性较差，不能满足新药研究与开发[7]。此外，有些受监测药物的活性代谢产物常常影响原药浓度的测定。如FPIA法测定全血环孢霉素A的浓度测量值明显偏高，主要理由就是代谢产物对原药的监测有干扰，使得监测结果出现偏差[8]。
总的来说，高效液相色谱法与荧光偏振免疫法两种策略测定抗癫痫药血清浓度具有相关性。采用HPLC法和FPIA法进行CBZ、PT、PB的血清浓度测定各有利弊，须结合检测药物种类数目、受检人数等合理选择监测方式。
[参考文献]
[1] 贾建平.神经病学[M].第6版.北京：人民卫生出版社，2010：292-312.
[2] 周素琴，张鸿燕，赵慧.血药浓度监测技术的进展及存在的理由[J].中国医院药学杂志，2009，29（7）：568-571.
[3] Commission on Classification and Terminology of the International League Againts Epilepsy.Proposal for revised classification of epilepsiesand epileptic syndromes[J].Epilepsia，1989，30（4）：389-399高效液相色谱法与荧光偏振免疫法在抗癫痫药血清浓度测定中的相关性比较论文资料由论文网www.808so.com提供,转载请保留地址..
[4] 王晓秋，温怀凯，朱光辉.HPLC法和FPIA法监测丙戊酸血药浓度的比较研究[J].中国卫生检验杂志，2012，22（7）：1593-1595.
[5] 袁波，袁媛.HPLC在食品安全监测中的研究进展[J].中国医药指南，2012，10（31）：77-79.
[6] 杨更亮，刘海燕.高效液相色谱整体柱在药物分离分析中的应用进展[J].中国科学，2010，40（6）：631-640.
[7] 王晓秋，温怀凯，朱光辉，等.FPIA法和HPLC法监测丙戊酸血药浓度的比较研究[J].中国卫生检验杂志，2012，22（7）：1593-1595.
[8] 谢服役，王峰，吴巧萍.CMIA、FPIA及MS在全血环孢霉素A浓度监测中的对比分析[J].医学研究杂志，2012，4（4）：118-120.
（收稿日期：2013-09-16）

点赞:32150 浏览:138615

© turnitin查重网 官方网站内容反馈请联系邮箱：@163vip.com 增值电信业务经营许可证备案号：沪ICP备16030259号