试议10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE,cAMP,cGMP及cAMP/cGMP影响

更新时间:2024-01-05 作者:用户投稿原创标记本站原创
[摘要] 目的:观察干姜、高良姜、丁香、小茴香、吴茱萸、肉桂、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄等10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE,cAMP,cGMP及cAMP/cGMP的影响,探讨温中散寒类中药温热药性的本质。策略:灌服4 ℃冰知母水提液复制大鼠胃实寒证模型,造模成功后随机分为模型组、阳性对照组、干姜组、高良姜组、丁香组、小茴香组、吴茱萸组、肉桂组、花椒组、胡椒组、荜茇组、荜澄茄组等10个治疗药组以及石膏、黄连2个反性药组,分别灌服相应的中药水煎液,观察各组中药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE,cAMP,cGMP及cAMP/cGMP的影响。结果:10味温中散寒药能显著升高胃实寒证大鼠胃组织中AC含量(P<0.05或P<0.01),降低PDE含量(P<0.05或P<0.01),升高cAMP含量及cAMP/cGMP(P<0.05或P<0.01)。结论:温中散寒类中药是通过升高胃组织细胞内AC与cAMP含量、降低PDE含量、调节cAMP/cGMP稳定而呈现温热性能,从而发挥温中散寒功效,恢复胃的生理功能。
[关键词] 温中散寒药;胃实寒证;AC;PDE;cAMP;cGMP;cAMP/cGMP;药性本质
[收稿日期] 2013-02-02
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81060348)
[通信作者] 秦华珍,博士,教授,Tel:13807816597,E-mail:qinhuazhen@126.com
温中散寒药药性皆属温热,主归脾胃经,功效温中散寒止痛,主要用治胃实寒证,证见脘腹冷痛,呕吐泄泻,舌淡苔白等。为了研究温中散寒类中药的药性本质,阐释温热药性的科学内涵,本研究以归脾胃经的干姜、高良姜、丁香、小茴香、吴茱萸、肉桂、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄等10味温中散寒药为研究对象,以归胃经的冰知母水煎液复制大鼠胃实寒证模型,选取辛热入脾的附子作为阳性对照药,并选取归胃经的寒性药石膏、黄连作为反性对照药,观察10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶(PDE)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及cAMP/cGMP的影响。
1 材料
1.1 动物 SPF级SD大鼠,体重(250±20) g,雄性,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,合格证号SCXK(湘)2009-0004。
1.2 药物 知母、附子、干姜、高良姜、丁香、小茴香、吴茱萸、肉桂、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄、石膏、黄连等均购自南宁生源中药饮片有限责任公司,生产批号分别为111209,110113,110914,110608,111027,110824,110928,110927,110815,111021,110927,110921,110402,111014。经广西中医药大学中药鉴定学教研室田辉教授鉴定均为正品。
1.3 试剂 AC,PDE,cAMP,cGMP酶联免疫试剂盒均购自加拿大ELIXIR医药公司,生产批号分别为A233FC,P232FC,C062FS,C153FS。
1.4 仪器 BP211D万分之一电子天平(德国赛多利斯);YKKYFM40制冰机(北京长流科学仪器公司);SAITEXIANGYI.PGL-16冷冻离心机(湖南赛特湘仪离心机公司);T-1000型电子天平[美国双杰兄弟(集团)有限公司双杰测试仪器厂,型号2000];EPOCH BIOTEK 全波长酶标仪(美国伯腾仪器有限公司);TS-2000A其林贝尔脱色摇床(江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。
2 策略
2.1 药物剂量的确定 药物剂量换算按照以下公式:每天给药剂量=药典规定成人剂量上限×0.018a/0.2,a为相应倍数,具体倍数通过预实验结果得出。知母为成人剂量换算大鼠剂量的18倍即19.44 g·kg-1,各治疗药为成人剂量的10倍。
2.10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE,cAMP,cGMP及cAMP/cGMP的影响论文资料由论文网www.808so.com提供,转载请保留地址.2 药物制备 取知母1 kg,加10倍量的水充分浸透,武火煮开后转文火保持微沸1 h,过滤,药渣加8倍量水再煎,时间40 min,过滤,合并2次滤液浓缩至0.5 g·mL-1生药浓度,分装保存于4 ℃冰箱备用。其余各组药物按照上法煎煮浓缩至所需浓度备用。
2.3 实验步骤 取大鼠150只,随机取其中10只作为空白对照组。其余动物用于复制胃实寒证模型。根据中医理论与胃实寒证的临床表现,胃实寒证常由多食生冷食物或寒邪直中脾胃所致,属于急病、暴病,具有病程短、及时有效治疗易康复的特点;并结合文献,采用灌服4 ℃冰知母水煎液的策略造模[1-2],给药剂量20 mL·kg-1,每天2次,给药2 d。造模完成后随机分成14组,即:模型组、阳性组、干姜、高良姜、丁香、小茴香、吴茱萸、肉桂、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄、石膏、黄连各给药组。空白组、模型组灌服自来水,阳性组灌服附子水煎液,其余各组灌服相应的治疗药,10 mL·kg-1,每隔12 h给药1次,共给药3次。末次给药后2 h腹腔注射10%水合氯醛3 mL·kg-1麻醉大鼠,剪开腹部并将胃组织完整取下,沿胃大弯剖开,用4 ℃冰生理盐水洗净内部残渣及血液,滤纸拭干,称取200 mg于玻璃匀浆器中,用移液加入10%的缓冲液(PBS),将匀浆器下端插入冰水中上下研磨6~8 min得到组织匀浆液,将制备好的匀浆4 ℃,3 000 r·min-1离心15 min,取上清液按照试剂盒说明书的操作步骤测定AC,PDE,cAMP,cGMP含量,计算cAMP/cGMP。
2.4 统计学策略 采用SPSS 18.0软件进行统计处理,以±s表示。符合正态性和方差齐性的资料采用单因素方差分析,不符合正态性和方差齐性的资料,采用非参数检验。P< 0.05具有统计学作用。3 结果
3.1 10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃AC,PDE含量的影响 与空白组比较,模型组AC值明显降低,PDE值明显升高(P<0.05)。给药后各温中散寒药组AC值均显著升高。与模型组比较,干姜、高良姜、丁香、小茴香、吴茱萸组有显著性差异(P<0.05),肉桂、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄组有非常显著性差异(P<0.01)。表明温中散寒药均能显著升高胃实寒证大鼠胃组织AC值。反性药黄连组、石膏组与空白组比较AC值明显降低(P<0.05),与模型组比较AC值无统计学意义。说明反性药组对胃实寒证大鼠AC值既无改善作用,也无叠加作用。
与空白组比较,模型组PDE值明显升高(P<0.05)。给药后各温中散寒药组PDE值均显著降低。与模型组比较,高良姜、肉桂、花椒、胡椒、荜澄茄组有显著性差异(P<0.05),干姜、丁香、小茴香、吴茱萸、荜茇组有非常显著性差异(P<0.01),表明温中散寒药均能显著降低胃实寒证大鼠胃组织PDE值。反性药黄连组、石膏组与空白组比较PDE值显著降低(P<0.05),与模型组比较PDE值无显著性差异。说明反性药组对胃实寒证大鼠PDE值既无改善作用,也无叠加作用,见表1。表1 10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE含量的影响(±s,n=10)
Table 1 Effect of 10 kinds of Chinese medicines warming middlejiao to dispel cold on the level of AC, PDE in gastric of rats with stomach excess cold syndrome(±s,n=10)
3.2 10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织cAMP,cGMP含量及cAMP/cGMP的影响 与空白组比较,模型组cAMP,cAMP/cGMP明显降低(P<0.01);cGMP值改变不明显。给温中散寒药后各组cAMP,cAMP/cGMP显著升高。各温中散寒药组cAMP值与模型组比较,小茴香、吴茱萸、肉桂组有显著性差异(P<0.05),干姜、高良姜、丁香、花椒、胡椒、荜茇、荜澄茄组有非常显著性差异(P<0.01)。各温中散寒药组cAMP/cGMP与模型组比较,高良姜、小茴香、吴茱萸、肉桂、花椒、荜茇组有显著性差异(P<0.05),干姜、丁香、胡椒、荜澄茄组有非常显著性差异(P<0.01)。与空白组比较,各组cGMP值改变无统计学意义。表明温中散寒药能显著升高胃实寒证大鼠胃组织cAMP,cAMP/cGMP,对cGMP影响不明显。反性药石膏、黄连组与空白组比较,其cAMP,cAMP/cGMP显著降低(P<0.01),cGMP无统计学差异;与模型组比较此3项变化均无统计学差异。说明反性药组对胃实寒证大鼠cAMP,cGMP,cAMP/cGMP既无改善作用,也无叠加作用,见表2。表2 10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织cAMP,cGMP含量及cAMP/cGMP的影响(±s,n=10)
Table 2 Effect of 10 kinds of Chinese medicines warming middlejiao to dispel cold on the level of cAMP,cGMP and cAMP/cGMP in gastric of rats with stomach excess cold syndrome(±s,n=10)
4 讨论
环磷酸腺苷(cAMP)与环磷酸鸟苷(cGMP)是细胞内的第二信使,是传递信息、调节细胞代谢,影响细胞功能的重要物质,在细胞代谢及多种生理效应的实现中具有广泛而关键的作用。正常情况下,人体内cAMP,cGMP的代谢呈动态平衡,两者在细胞内信息传递过程中作用相反而又相互制约[3]。美国生物学家Goldberg[4]观察到这一点而提出细胞功能调节的“阴阳学说”,他认为cAMP,cGMP通常呈拮抗性共同参与细胞反应的调节。并进一步提出了生物制约二元论学说——阴阳学说,认为这种拮抗调节作用可以用中医的“阴”和“阳”两词来概括。1975年Eniot[5]则明确提出cAMP为阴,cGMP为阳。现代临床研究发现:寒证病人尿中cGMP排出量明显高出正常人,服用热性药之后可以提高细胞内cAMP含量,使失常的cAMP/cGMP恢复正常[6]。中医认为寒凉属阴,温热属阳。据此,以cAMP,cGMP及cAMP/cGMP作为阐释温中散寒药温热药性本质的重要指标。
cAMP,cGMP浓度的调节主要由AC的合成作用与PDE的水解作用之间的平衡决定。AC是cAMP的唯一合成酶,其能够催化三磷酸腺苷(ATP)合成cAMP,而PDE则是唯一降解cAMP,cGMP使其失活的酶,其能够降解细胞内cAMP或cGMP,从而终结这些第二信使所传导的生化作用。因此,AC,PDE与cAMP,cGMP是紧密联系、相互影响的。当外来信号经跨膜传递并引起一系列生理反应使AC激活后,cAMP和cGMP产生,PDE家族使之水解失活为单磷酸核5,第二信使所传导的生化作用则被终结。
本实验结果显示冰知母水提液可引起大鼠胃实寒证,导致胃组织中AC,cAMP含量降低,PDE水平升高,cAMP/cGMP的比例失衡。10味温中散寒药能够升高胃实寒证大鼠胃组织细胞内AC,cAMP,cAMP/cGMP水平,降低PDE水平,说明温中散寒药的温热药性本质与10味温中散寒药对胃实寒证大鼠胃组织AC,PDE,cAMP,cGMP及cAMP/cGMP的影响相关范文由写论文的好帮手www.808so.com提供,转载请保留.此4项指标有着不可分割的联系,可以推断:温中散寒类中药是通过升高细胞内AC的含量,降低PDE的含量,从而加快cAMP合成、减少cAMP水解,进而升高胃实寒证大鼠胃壁细胞内cAMP水平,调节cAMP/cGMP水平,恢复胃的正常运化功能。寒性药石膏、黄连作为反性对照,实验结果显示:石膏组、黄连组AC,PDE,cAMP,cAMP/cGMP与各温中散寒药组结果相反,与空白组比较有显著性差异,与模型组比较有相同趋势但并无统计学作用,说明寒性药对胃实寒证大鼠无显著叠加效应。本研究结果证实:温中散寒药的温热药性本质与AC,PDE,cAMP,cAMP/cGMP的转变有密切关系。
[参考文献]
[1] 聂子文,郭建生,陈君,等.乌药提取物对胃实寒模型大鼠cAMP,cGMP,GAS,MTL水平的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(20):162.
[2] 刘红艳,郭建生,张猛,等.檀香对胃实寒模型大鼠的胃排空率、cAMP及cGMP的影响[J].中药药理与临床,2011,27(5):74.
[3] 陈敏,余江平,黄敏.环核苷酸的生理作用及临床应用[J].中国药房,2007,18(11):872.
[4] Goldberg N D.Advances in cyclic nucleotide research[M].New York: Ren Press,1975:307.
[5] 郑广华,张善澂.阴阳学说与环核苷酸[J] .自然杂志,1979,2(4):208.
[6] 沈映君,陈长勋.中药药理学[M].上海:上海科学技术出版社,2008:7.
[责任编辑 张宁宁]

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