对于加味加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠胃肠结构及功能影响
更新时间：2024-02-03
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摘要：目的建立慢性身心应激大鼠模型，探讨加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠行为学、胃排空、小肠推进、胃电图、胃肠神经递质的影响，以不同方面研究加味四逆散干预应激性胃肠功能障碍的机制。另建立慢性身心应激大鼠模型，探讨加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠胃粘膜形态、胃粘膜EGF、EGFR蛋白、胃粘膜三叶因子1（TFF1）、内皮素1(ET-1)mRNA表达的影响，以形态结构的角度探讨加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠的影响，并对其机制进行初步研究。办法第一部分：取Wistar雄性大鼠60只，随机分为6组，即正常组、模型组、西沙比利组、加味四逆散方高，中，低剂量组，每组10只，除空白组外，其他五组均采取身心应激模式造模，连续造模4周。以第3周起加味四逆散方高，中，低剂量组灌胃治疗，西沙比利组从西沙比利混悬液灌胃治疗；空白、模型组则给予等体积生理盐水灌胃治疗。（1）造模期间，每日观察并记录各组大鼠精神状态、兴奋程度、情绪反应、行为状态、活跃情况、睡眠行为，皮肤毛发色泽和状态等状况，每天观察并记录大鼠的饮水量、进食量，分别于实验前1天和试验后的第7、14、21、28d用电子秤称量每只大鼠体重,观测大鼠体质量转变状况；造模结束后行旷场试验（Open-field法）测定实验大鼠跨格运动次数和直立运动次数并在实验室游泳池内测定大鼠游泳力竭时间。（2）经加味四逆散等干预后于4周末空腹检测模型大鼠胃肠动力，用生物机能实验体系观察试验大鼠胃电变化，了解正常组，模型组，加味四逆散高，中，低剂量组，西沙比利组大鼠的胃电活动在幅度、频率上的差别，检测完毕后对正常组，模型组，加味四逆散高，中，低剂量组，西沙比利组胃肠动力及胃电图相应数据分别进行统计学分析。（3）应激刺激造模结束后免疫组化法测定实验大鼠胃粘膜组织COX-2、结肠粘膜组织c-kit的平均光密度值变化。第二部分：Wistar雄性大鼠60只随机分为6组，即正常组、模型组、奥美拉唑组、加味四逆散方高，中，低剂量组，每组10只，除空白组外，其他五组均给予身心应激模式造模，连续造模4周。以第3周起加味四逆散方高，中，低剂量组用加味四逆散灌胃治疗，奥美拉唑组从奥美拉唑混悬液灌胃治疗；空白、模型组则给予等体积生理盐水灌胃治疗。（1）应激刺激造模结束后行胃粘膜形态及结构，胃酸及胃粘膜血流量的检测。（2）应激刺激造模结束后行胃粘膜EGF、EGFR蛋白表达检测。（3）应激刺激造模结束后逆转录PCR法测定模型大鼠胃粘膜三叶因子1（TFF1）mRNA、内皮素1(ET-1) mRNA的表达。结果第一部分结果：（1）受试大鼠在实验前均体现出良好的精神状态，随应激时间的延长，第3周从后模型组大鼠的饮水量及摄食量呈现明显的下降走势，而加味四逆散方各剂量组及西沙比利组用药后饮水量及摄食量下降走势不同程度减缓，至第4周,其饮水量、摄食量不同程度增多，与模型组对比，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与西沙比利组对比，加味四逆散高剂量组大鼠饮水量及摄食量显著增多，差别有明显性作用(P＜0.05)；造模后的第4周末，与模型组对比，加味四逆散方各剂量组及西沙比利组体重增长不同程度增多，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与西沙比利组对比，第4周末加味四逆散高剂量组体重增长量增多明显，差别有明显性作用(P＜0.05)；第4周末，与模型组对比，加味四逆散方各剂量组及西沙比利组跨格运动、垂直运动的得分均显著增多，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01);与西沙比利组对比，加味四逆散高剂量组跨格运动及垂直运动得分均显著增多，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；造模后第4周末，与模型组对比，加味四逆散方高、中、低剂量组及西沙比利组力竭游泳时间不同程度延长，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)，与西沙比利组对比，加味四逆散高剂量组力竭游泳时间显著增多，差别有明显性作用(P＜0.05)。（2）与模型组对比，加味四逆散各剂量组，西沙比利组胃排空率及小肠推进比均显著升高，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与西沙比利组对比，加味四逆散高剂量组胃排空率升高不显著(P＞0.05)，而小肠推进比升高显著(P＜0.05)；与模型组对比，加味四逆散各剂量组，西沙比利组慢波节律、主频率、主功率、快波频率、胃电慢波振幅显著增强，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)，其中加味四逆散高剂量组大鼠胃电波接近正常水平；与西沙比利组对比，加味四逆散高剂量组大鼠慢波节律及快波频率均有显著增强(P＜0.05或P＜0.01)；（3）与模型组对比，加味四逆散各剂量组、西沙比利组大鼠胃粘膜组织COX-2平均光密度值不同程度降低，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与西沙比利组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜组织COX-2平均光密度值降低，差别有明显性作用（P＜0.05或P＜0.Ol）。与模型组对比，加味四逆散各剂量组、西沙比利组大鼠结肠粘膜组织c-kit平均光密度值不同程度升高，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与西沙比利组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠结肠粘膜组织c-kit平均光密度值升高，差别有明显性作用（P＜0.05或P＜0.Ol）。第二部分结果：（1）各组大鼠胃粘膜血流量变化的对比：与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜血流量不同程度升高，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜血流量升高，差别有明显性作用（P＜0.05或P＜0.Ol）。各组大鼠胃液总酸度（pH值）变化的对比：与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃液PH值不同程度升高，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃液PH值升高不显著，差别无明显性作用（P＞0.05）。各组大鼠肉眼下胃粘膜形态变化的对比：加味四逆散高剂量组大鼠胃粘膜损伤减轻最显著，已接近正常水平，奥美拉唑组、加味四逆散中剂量组及加味四逆散低剂量组大鼠胃粘膜不同程度好转。各组大鼠胃粘膜损伤溃疡指数(UI)变化的对比：与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜损伤溃疡指数(UI)不同程度降低，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散高剂量组大鼠胃粘膜损伤溃疡指数(UI)显著降低，差别有明显性作用（P＜0.05）。各组大鼠胃黏膜病理组织学观察及损伤程度评级变化的对比：模型组大鼠胃粘膜出血坏死溃疡显著。加味四逆散高剂量组镜下可见胃粘膜病损程度较模型组明显减轻，加味四逆散中、低剂量组可见胃粘膜不同程度好转。各组大鼠胃粘膜上皮细胞超微结构变化对比：模型组大鼠胃粘膜上皮细胞坏死显著。加味四逆散高剂量组大鼠胃粘膜上皮细胞间连接紧密，胞膜结构完整，细胞核形态正常。奥美拉唑组大鼠胃粘膜上皮细胞胞膜结构基本完整，胞浆中细胞器分布欠均匀。加味四逆散中、低剂量组大鼠胃粘膜上皮细胞不同程度恢复正常；（2）各实验组大鼠胃粘膜组织的EGF及EGFR蛋白平均光密度值对比：与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜组织EGF蛋白平均光密度值不同程度降低，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜组织EGF蛋白平均光密度值降低，差别有明显性作用（P＜0.05或P＜0.Ol）；与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜组织EGFR蛋白平均光密度值不同程度降低，差别有明显性作用(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜组织EGFR蛋白平均光密度值降低，差别有明显性作用（P＜0.05或P＜0.Ol）。（3）各组大鼠胃粘膜三叶因子1（TFF1）、内皮素1(ET-1) mRNA的对比：与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜三叶因子1（TFF1）mRNA相对表达量不同程度升高，差别有明显性(P﹤0.05或P﹤0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜三叶因子1（TFF1）mRNA相对表达量不同程度升高，差别有明显性（P＜0.05或P＜0.Ol）；与模型组对比，加味四逆散各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃粘膜内皮素1(ET-1)mRNA相对表达量不同程度降低，差别有明显性(P＜0.05或P＜0.01)；与奥美拉唑组对比，加味四逆散中，高剂量组大鼠胃粘膜内皮素1(ET-1)mRNA相对表达量降低，差别有明显性（P＜0.05或P＜0.Ol）；结论以第一部分可知：（1）加味四逆散可明显改进慢性身心应激模型大鼠行为学的异常，解除因应激导致的模型大鼠的抑郁情况。（2）加味四逆散能够显著改进慢性身心应激大鼠的胃电波异常，可推动胃排空和小肠推进，其意义可能是通过推动胃电活动，增快胃平滑肌收缩等途径而实现的，同时加味四逆散推动大鼠胃肠动力的效应呈量效联系。（3）加味四逆散可明显改进慢性身心应激模型大鼠胃肠神经递质的异常，缓解因胃肠神经递质紊乱导致的模型大鼠胃肠功能失调。以第二部分可知：（1）加味四逆散可明显改进慢性身心应激模型大鼠胃粘膜形态及结构，胃酸及胃粘膜血流量的异常，解除因慢性身心应激对模型大鼠胃粘膜的损伤。（2）加味四逆散可明显改进慢性身心应激模型大鼠胃粘膜组织细胞的功能，解除因应激导致的模型大鼠的胃粘膜组织EGF、EGFR蛋白表达的异常。（3）加味四逆散可明显改进慢性身心应激模型大鼠胃粘膜三叶因子1（TFF1）、内皮素1(ET-1)mRNA表达的异常，解除因应激导致的模型大鼠胃粘膜的损害。关键词：加味四逆散论文应激论文胃肠动力论文形态学论文胃肠激素论文
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Abstract15-23
英文缩略词表23-26
前言26-29
第一部分: 加味四逆散对慢性身心应激大鼠胃肠功能的影响29-70
实验
一、加味四逆散对慢性身心应激大鼠行为学的影响29-42
1 材料与办法29-32
1.1 实验材料29-30
1.1.1 实验动物及分组29
1.1.2 药品29
1.1.3 主要仪器29-30
1.2 实验办法30-32
1.2.1 模型制备30-31
1.2.2 药物配制剂量31
1.2.3 实验室检测指标及办法31-32
1.2.4 统计办法32
2 结果32-37
2.1 各组大鼠一般状况的变化对比32-33
2.2 各组大鼠摄食量及饮水量状况变化的对比33-35
2.3 各组大鼠体重增长状况变化对比35
2.4 各组大鼠跨格运动、垂直运动状况变化对比35-36
2.5 各组大鼠力竭游泳时间变化对比36-37
3 讨论37-42
3.1 身心应激的论述探讨概况讨论37-38
3.2 加味四逆散对应激模型大鼠行为学影响的讨论38-42
实验二、加味四逆散对慢性身心应激大鼠胃肠动力的影响42-55
1 材料与办法42-44
1.1 实验材料42-43
1.1.1 实验动物及分组42
1.1.2 药品42-43
1.1.3 主要实验仪器43
1.2 实验办法43-44
1.2.1 模型制备43
1.2.2 药物配制剂量43
1.2.3 实验室检测指标及办法43-44
1.3 统计学处理44
2 结果44-47
2.1 各组大鼠胃电参数的变化对比44-46
2.2 各组大鼠胃排空率变化的对比46-47
2.3 各组大鼠小肠推进比的变化对比47
3 讨论47-55
3.1 现代医学对胃肠运动的认识47-49
3.2 现代医学对胃肠动力障碍的认识49-51
3.3 临床探讨胃肠动力的办法51-52
3.4 中医学对胃肠运动的认识52-55
实验三、加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠胃肠神经递质的影响55-70
1 材料与办法55-59
1.1 实验材料55-57
1.1.1 实验动物及分组55
1.1.2 药物与试剂55-56
1.1.3 主要仪器56-57
1.2 实验办法57-59
1.2.1 模型制备57
1.2.2 药物配制剂量57
1.2.3 实验室检测指标及办法57-59
1.3 数据处理办法59
2 结果59-60
2.1 各组大鼠胃粘膜组织 COX-2 平均光密度值变化对比59-60
2.2 各组大鼠结肠粘膜组织 c-kit 平均光密度值变化对比60
3 讨论60-70
3.1 COX 论述的发展61-64
3.2 产生与调节胃肠动力的重要结构64-65
3.3 ICC 网络对 Kit 受体的依赖及 C-kit 基因表达65-67
3.4 Cajal 间质细胞的胃肠起搏及动力调节功能67-68
3.5 Cajal 间质细胞变异与胃肠动力障碍性疾病68-70
第二部分: 加味四逆散对慢性身心应激大鼠胃肠组织学的影响70-117
实验一、加味四逆散对慢性身心应激大鼠胃粘膜形态的影响70-94
1 材料与办法70-79
1.1 实验材料70-73
1.1.1 实验动物及分组70
1.1.2 药物与试剂70-72
1.1.3 主要仪器72-73
1.2 实验办法73-79
1.2.1 模型制备73
1.2.2 药物配制剂量73
1.2.3 实验室检测指标及办法73-79
1.3 统计学处理79
2 结果79-84
2.1 各组大鼠胃粘膜血流量变化对比79-80
2.2 各组大鼠胃液总酸度（pH 值）变化对比80
2.3 各组大鼠肉眼下胃粘膜形态变化对比80-81
2.4 各组大鼠胃粘膜损伤溃疡指数(UI)变化对比81
2.5 各组大鼠胃黏膜病理组织学观察及损伤程度评级变化对比81-83
2.6 各组大鼠胃粘膜上皮细胞超微结构变化对比83-84
3 讨论84-94
实验二 加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠胃粘膜 EGF、EGFR 蛋白表达的影响94-104
1 材料与办法94-98
1.1 实验材料94-96
1.1.1 实验动物及分组94
1.1.2 药物与试剂94-95
1.1.3 主要仪器95-96
1.2 实验办法96-98
1.2.1 模型制备96
1.2.2 药物配制剂量96
1.2.3 实验室检测指标及办法96-98
2 结果98-100
2.1 各组大鼠胃粘膜 EGF（阳性表达率）平均光密度值变化对比98-99
2.2 各组大鼠胃粘膜组织 EGFR 蛋白平均光密度值变化对比99-100
3 讨论100-104
实验三 加味四逆散对心身应激模型大鼠胃粘膜三叶因子1、内皮素-1 mRNA 表达的影响104-117
1 材料与办法104-108
1.1 实验材料104-105
1.1.1 实验动物及分组104
1.1.2 药物与试剂104-105
1.1.3 主要仪器105
1.2 实验办法105-108
1.2.1 模型制备105-106
1.2.2 药物配制剂量106
1.2.3 实验室检测指标及办法106-107
1.2.4 数据处理办法107-108
2 结果108-111
2.1 各组大鼠胃粘膜 TFF1 mRNA 基因产物相对表达量变化108-109
2.2 各组大鼠胃粘膜 ET-1 mRNA 基因产物相对表达量变化109-111
3 讨论111-117
讨论117-131
1 中医对慢性心身应激性疾病的认识117-124
1.1 病名117
1.2 病因病机117-118
1.3 治则治法118-119
1.4 方药119-124
1.4.1 加味四逆散的来源及四逆散六经病位119
1.4.2 四逆散证的病因病机119-120
1.4.3 四逆散的组方及功效120
1.4.4 四逆散临床运用120-121
1.4.5 加味四逆散方义详解121-124
2 慢性身心应激动物模型的选择依据124-125
3 试验指标的选择依据125-128
4 本课题创新之处128-129
5 有着不足的深思129-131
5.1 模型制作129
5.2 下一步探讨思路129-131
5.2.1 应重视心理应激的临床探讨129
5.2.2 应重视心理应激历程中，中医证候的演变规律129
5.2.3 重视中药复方的探讨129-130
5.2.4 以中西医结合角度对应激探讨历程中的深层次不足进行深入研究130-131
结论131-132
参考文献132-145
文献综述145-182
综述一、中医药治疗身心应激性胃肠功能障碍及胃粘膜损伤的探讨发展145-162
综述二、身心应激性胃肠功能障碍及胃粘膜损伤机制的现代探讨发展162-182
附图182-186
附：学习期间发表的论文186-187
致谢187
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