摘要：目的:研究多肽类降血糖药物E2HSA的体外活性和动物体内药代动力学特点。方法:测定E2HSA和Exendin-4刺激胰岛瘤细胞(RINm-5F细胞)产生cAMP的量来反映其体外生物活性;建立化学发光酶联免疫检测法(CLEIA)测定猕猴血清中E2HSA和Exendin-4的浓度并对其方法学确证;研究比较E2HSA和Exendin-4在猕猴体内的药代动力学特征;硫酸铵盐沉淀法CLEIA研究E2HSA在猕猴体内的代谢转化和活性形式研究。结果和:1.用E2HSA和Exendin-4刺激RINm-5F细胞,使其与细胞上的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体,孵育一段时间后,用细胞裂解液将细胞裂解,释放出信使cAMP,用自主研发的免疫试剂盒测定细胞裂解释放出的cAMP含量。受体激动剂E2HSA、Exendin-4浓度的升高,细胞产生的cAMP量逐渐增多。但当药物浓度增加到一定时,细胞产生的cAMP量达到一个平台期,可能是药物和细胞上的受体达到饱和。E2HSA和Exendin-4的EC50分别是9.12μmol·mL~(-1)和0.07μmol·mL~(-1),E2HSA生物活性比Exendin-4的生物活性低,推测其原因,可能是E2HSA中连接有白蛋白,体积大,和细胞受体时E2HSA空间位阻影响了其亲和力。2.建立了专属性好、准确、精密的CLEIA法分析生物样品中E2HSA和Exendin-4的含量,在E2HSA浓度2-500 ng·mL~(-1)范围内与其它类型白蛋白无交叉反应,最低定量下限为2 ng·mL~(-1),具有良好的线性关系。板内精密度为2.5 %-7.2 %,板间精密度为6.4%-15.2 %,准确度为-3.0%-1.2%。样品稳定性实验,E2HSA 3个质控浓度的血清样品在-80℃冻存6天稳定,精密度为3.2%-7.9%,准确度为-3.7%--10.1%,血清样品稀释50倍和100倍后无稀释效应。Exendin-4的标准曲线范围是1-100 ng·mL~(-1),最低定量下限为100 ng·mL~(-1),具有良好的线性关系。板内精密度和板间精密度为5.3%-11.6%和1.1%-14.1%,准确度为1.7%-7.0%。此方法能E2HSA和Exendin-4的临床前药代动力学研究要求。3.猕猴单次皮射0.3 mg·kg~(-1)(39.3×10-10 mol·kg~(-1))E2HSA后,清除半衰期是61.38h,AUC(0-t)是9272.91 ng·h·mL~(-1),CL是32.15 mL·h·kg~(-1),MRT(0-t)是168.72h,猕猴单次皮射15μg·kg~(-1)(42.97×10-10 mol·kg~(-1)) Exendin-4后,在6h后基本检测不到血药浓度,E2HSA的半衰期延长。4.硫酸铵盐沉淀法CLEIA法可以检测E2HSA动物体内的代谢转化情况,包括检测原形E2HSA的浓度和其代谢产物Exendin-4的浓度。E2HSA动物体内后,小分子Exendin-4逐渐从E2HSA上脱落下来。E2HSA在体内逐步转化成活性更高的形式Exendin-4发挥降血糖作用。关键词：E2HSA论文Exendin-4论文生物活性论文CLEIA论文药物代谢动力学论文
中文摘要5-7
ABSTRACT7-9
符号9-10
前言10-15
章 E2HSA 生物活性测定方法以及与Exendin-4 生物活性比较研究15-25
实验原理15-16
实验16-17
实验方法17-21
结果21
实验结果21-24
讨论及小结24-25
章 猕猴血清中E2HSA 和Exendin-4 的定量检测分析方法的建立25-39
实验原理25
实验25-26
实验方法26-30
实验结果30-36
讨论及小结36-39
章 E2HSA 与Exendin-4 在猕猴体内的药代动力学特点比较研究39-45
实验39-40
实验方法40-41
实验结果41-44
讨论及小结44-45
章 E2HSA 的体内代谢转化及活性形式研究45-56
实验原理45
实验45-46
实验方法46-49
实验结果49-55
讨论及小结55-56
56-57
参考文献57-59
综述59-68
参考文献65-68
致谢68-69
攻读学位期间发表的学术论文69
-3.0%-1.2%。样品稳定性实验,E2HSA3个质控浓度的血清样品在-80℃冻存6天稳定,精密度为3.2%-7.9%,准确度为-3.7%--10.1%,血清样品稀释50倍和100倍后无稀释效应。Exendin-4的标准曲线范围是1-100ng·mL~(-1),最低定量下限为100ng·mL~(-1),具有良好的线性关系。板内精密度和板间精密度为5.3%-11.6%和1.1%-14.1%,准确度为1.7%- WWw.808so.com 808论文查重
降血糖蛋白E2HSA体外活性和体内药代动力学探讨
更新时间：2024-02-07
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