摘要：目的考察西罗莫司在中国健康男性志愿者体内的药动学参数与MDR1CYP3A4*1G和CYP3A5*3基因多态性的联系,探讨这些基因位点对西罗莫司药动学的影响,初步探讨基因多态性对西罗莫司临床个体化用药的指导作用。策略本试验药动学部分来自单次口服西罗莫司的生物等效性试验(n=67),建立了人全血中测定西罗莫司浓度的LC-MS/MS法,以32-去甲氧基西罗莫司为内标,液液萃取法进行样品前处理。色谱柱为Phenomenex C18(50×2.0mm,5μm),梯度洗脱,正离子检测,多离子反应监测扫描,西罗莫司m/z为931.3→864.3,内标32-去甲氧基西罗莫司m/z为901.3→816.6。健康志愿者单次口服西罗莫司5mg,于给药前及给药后0.5、1、2、3、4、6、8、12、16、24、48、72、96、120、144h取上肢静脉血5mL,获得完整的药时曲线。HRM曲线法和直接测序法测定每名志愿者MDR1、CYP3A4*1G和CYP3A5*3五个位点的基因分型。用ANOVA浅析和Kruskal-Walps Test检验分别对Cmax、AUC0-∞及Tmax与MDR1、CYP3A4*1G和CYP3A5*3基因型的联系进行统计浅析。最小显著差别法(LSD)用于多组比较,P0.05认为有着显著差别。结果1.LC-MS/MS法测定67名健康志愿者单次口服西罗莫司后的血药浓度,所得的药动学参数体现出较高的个体差别。2.MDR1C1236T、G2677T/A、C3435T、CYP3A4*1G和CYP3A5*3各位点的基因分布符合哈迪-温伯格平衡定律,并与文献报道的中国人群的频率一致。3.统计比较表明CYP3A5*3、CYP3A4*1G及MDR1C3435T基因多态性对西罗莫司的Cmax或AUC0-∞有显著影响,MDR1C1236T及G2677T/A对Cmax和AUC0-∞均无显著联系,而且所有位点的基因多态性都不和西罗莫司的Tmax有任何联系。1) MDR1C3435T位点中,CC基因型(n=31)与CT基因型(n=29)之间在Cmax观察到了显著的差别(P=0.007),野生纯合型CC基因型携带者的Cmax是变异杂合型CT基因型的1.4倍。2)统计浅析结果显示,CYP3A4*1G*1G基因型携带者(n=6)与CYP3A4*1*1G基因型携带者(n=19)对SRL药动学仅在AUC0-∞之间有显著性差别(P=0.021),前者西罗莫司在全血中的暴露量是后者的1.7倍,而该位点三种基因分型的志愿者在Cmax上未观察到显著性差别。3)在CYP3A5*3位点,观察到不同基因型携带者对西罗莫司药动学参数有显著差别。带有CYP3A5*3*3基因型的志愿者(n=37)的西罗莫司的Cmax是带有CYP3A5*1*1基因型志愿者(n=6)的1.4倍,差别显著(P=0.036),但在AUCo-∞上两者未见显著差别。变异纯合型CYP3A5*3*3基因携带者(n=37)与变异杂合型CYP3A5*3*1(n=24)仅在AUCo-∞上有着显著差别(P=0.007),前者西罗莫司在全血中的暴露量达到后者的1.4倍。结论本项探讨表明,LC-MS/MS法测定人全血中西罗莫司的浓度专属性强,具有快速、灵敏、准确、简便的特点,符合DA关于生物样品浅析策略验证的要求。HRM曲线法浅析MDR1、CYP3A4*1G和CYP3A5*3各位点的基因分型,策略准确简便,省时省力。CYP3A5*3、CYP3A4*1G及MDR1C3435T基因多态性显著影响西罗莫司的药动学,MDR1C1236T及G2677T/A对西罗莫司的药动学没有显著联系。本探讨结果提示,在临床用药上,CYP3A4*1G和CYP3A5*3的基因信息对西罗莫司的个体化合理用药的优化可以提供帮助,CYP3A4*1G*1G基因型及CYP3A5*3*3基因型携带者需要特别关注,必要情况下可以考虑调节西罗莫司的剂量。关键词：西罗莫司论文药动学论文HRM论文CYP3A4/5论文MDR1论文
本论文由www.808so.com缩写字母表5-7
摘要7-9
ABSTRACT9-11
前言11-15
第一部分 LC-MS/MS法测定西罗莫司血药浓度的策略建立15-27
1 引言15
2 仪器与试剂15-16
2.1 仪器15-16
2.2 对照品与试剂16
3 实验策略16-18
3.1 储备液配制16-17
3.2 工作液配制17
3.3 标准曲线和质控配制17
3.4 样品处理17
3.5 色谱条件17-18
3.6 质谱条件18
4 结果18-20
4.1 策略专属性18
4.2 标准曲线18-19
4.3 最低定量浓度19
4.4 精密度19
4.5 准确度和提取回收率19
4.6 基质效应19-20
4.7 稳定性20
4.8 稀释试验20
5 讨论20-22
6 小结22-23
7 附图及附表23-27
第二部分 西罗莫司在中国男性健康志愿者体内的药物动力学探讨27-41
1 引言27
2 仪器与试药27
2.1 仪器27
2.2 试药27
3 探讨策略27-29
3.1 探讨人群27-28
3.2 给药案例28
3.3 样浅析策略28-29
3.4 药物动力学参数的计算29
3.5 安全性评价29
4 结果29-30
4.1 志愿者情况29-30
4.2 安全性评价30
4.3 药动学评价30
5 讨论30-31
6 小结31-32
7 附图及附表32-41
第三部分 HRM浅析技术测定MDR1与CYP3A4/5基因型的策略41-54
1 引言41-42
2 仪器与试剂42
2.1 仪器42
2.2 试剂42
3 试验策略42-46
3.1 DNA抽提42-43
3.2 PCR扩增43-45
3.3 琼脂糖凝胶电泳45
3.4 HRM浅析SNPs基因型45
3.5 直接测序法测定SNPs基因型45-46
4 结果46
4.1 电泳结果46
4.2 HRM结果46
4.3 测序结果46
5 讨论46-47
6 小结47-48
7 附图及附表48-54
第四部分 MDR1与CYP3A4/5基因多态性与西罗莫司药动学的相关性探讨54-71
1 引言54
2 试验仪器与试剂54-55
3 探讨策略55-56
3.1 探讨人群55
3.2 试验策略55-56
4 结果56-58
4.1 健康志愿者各位点的基因分型56
4.2 各位点的等位基因频率及基因型频率56
4.3 西罗莫司的药动学参数与各位点的基因分型的相关性56
4.4 MDR1与CYP3A4/5基因多态性对西罗莫司药动学参数的影响56-57
4.5 CYP3A4/5联合基因型和MDR1连接基因型对西罗莫司药动学参数的影响57-58
5 讨论58-60
6 结论60-61
7 附图及附表61-71
参考文献71-81
致谢81-82
附录82-92
附录1 攻读学位期间发表的文章及所获的奖励82-83
附录2 综述83-92
参考文献87-92
探讨药动学CYP3A4/5和MDR1基因多态性HRM检测及与西罗莫司健康人药动学联系科技
更新时间：2024-01-19
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