摘要：目前转基因技术已经开始进入大量商品化的阶段，为人们带来了巨大的经济利益与生活利益。同时，转基因产品的不足也呈现出来，人们开始担心转基因技术会对人类和环境产生负面的效果。如何正视转基因技术，合理的、高效的运用转基因技术，检测并告知消费者转基因产品信息就显得十分重要。本课题主要针对转基因植物蛋白的检测进行探讨，建立转基因植物蛋白的权威计量策略，根据所建立的测量策略，研制转基因植物蛋白标准物质。通过参与国际比对，取得国际等效性，保证了试验策略的可靠性与准确性。以而建立完整的转基因植物蛋白量值溯源传递系统，解决目前转基因植物蛋白检测结果无法溯源等不足。利用同位素稀释质谱法、ELISA等策略对转基因植物中的Bt蛋白（Cry1Ab、Cry1Ac）进行定性、定量浅析。同时研制相应的Bt蛋白以及肽段标准物质，为今后的转基因蛋白检测提供可靠、有效的保证。转基因蛋白测定结果的准确可比，保障了人民大众的健康，保护了国家对外贸易中的优势地位。关键词：转基因植物蛋白论文Bt蛋白论文量值溯源传递论文标准物质论文同位素稀释质谱法论文ELISA策略论文
本论文由www.808so.com摘要5-6
ABSTRACT6-15
第一章 前言15-31
1.1 转基因技术15
1.2 转基因植物15-17
1.3 Bt 蛋白介绍17-18
1.4 检测策略18-22
1.4.1 免疫法检测转基因蛋白18-21
1.4.1.1 酶联免疫法20-21
1.4.1.2 蛋白质印迹法21
1.4.2 质谱法21-22
1.4.2.1 蛋白质序列测定21-22
1.4.2.2 质谱定量22
1.5 量值溯源传递的要求和作用22-23
1.5.1 量值溯源传递的要求22
1.5.2 量值溯源传递的途径22-23
1.6 蛋白质量值溯源传递国内外近况23-26
1.6.1 蛋白质量值溯源传递国外近况23-24
1.6.2 蛋白质量值溯源传递国内探讨近况24-26
1.7 转基因蛋白量值溯源传递框架系统的设计和建立26-28
1.8 转基因蛋白量值溯源传递中的基本不足和关键技术28-29
1.9 论文探讨的目的及内容29-31
1.9.1 Bt 蛋白检测29
1.9.1.1 探讨目标29
1.9.1.2 探讨内容29
1.9.2 肽段含量国际比对29-30
1.9.2.1 探讨目标29
1.9.2.2 探讨内容29-30
1.9.3 Bt 蛋白标准物质研制30-31
1.9.3.1 探讨目标30
1.9.3.2 探讨内容30-31
第二章 转基因 Bt 蛋白测定31-59
2.1 试剂和仪器31-33
2.1.1 试剂配制32-33
2.2 Bt 蛋白质定性策略33-36
2.2.1 质谱策略鉴定33-34
2.2.2 酶联免疫策略鉴定34-35
2.2.3 蛋白质印迹策略鉴定35
2.2.4 小结35-36
2.3 肽段含量测定36-45
2.3.1 反相色谱测定肽段纯度36-39
2.3.2 同位素稀释质谱法测定肽段含量39-43
2.3.2.1 水解时间的确定40-43
2.3.2.2 肽段含量的测定43
2.3.3 小结43-45
2.4 Bt 蛋白含量测定45-56
2.4.1 Bt 蛋白纯度测定45-48
2.4.1.1 反相色谱策略测定 Bt 蛋白纯度45-46
2.4.1.2 排阻色谱策略测定 Bt 蛋白纯度46-48
2.4.1.3 凝胶电泳策略测定 Bt 蛋白纯度48
2.4.2 水解 Bt 蛋白定量48-52
2.4.2.1 Bt 蛋白水解时间的确定50-52
2.4.2.2 基于氨基酸的同位素稀释质谱法测定 Bt 蛋白含量52
2.4.3 酶切 Bt 蛋白定量52-55
2.4.3.1 Bt 蛋白酶切时间的确定53-54
2.4.3.2 基于肽段的同位素稀释质谱法测定 Bt 蛋白含量54-55
2.4.4 小结55-56
2.5 水稻中 Bt 蛋白含量56-59
2.5.1 水稻中 Bt 蛋白提取策略探讨56-57
2.5.2 水稻中 Bt 蛋白的同位素稀释质谱策略57-58
2.5.3 小结58-59
第三章 蛋白质国际比对探讨59-77
3.1 多肽蛋白质同位素稀释质谱国际比对探讨59-77
3.1.1 实验试剂和器材59-60
3.1.2 实验案例60-61
3.1.2.1 肽水解时间的优化60
3.1.2.2 多肽溶液浓度同位素稀释质谱策略测定60-61
3.1.3 实验结果61-66
3.1.4 同位素稀释质谱法测定结果不确定度评定66-77
第四章 标准物质研制77-125
4.1 CryIAb 和 CryIAc 标准物质的研制77-95
4.1.1 Bt 蛋白标准物质研制技术路线77
4.1.2 标准物质候选物的确定及其性质77-78
4.1.3 标准物质的制备78-79
4.1.4 Bt 蛋白标准物质参考值的测定79-86
4.1.4.1 Bt 蛋白标准物质纯度的测定79
4.1.4.2 Bt 蛋白标准物质中的无机成分的测定79-81
4.1.4.3 Bt 蛋白标准物质分子量的测定81-85
4.1.4.4 质谱策略鉴定85-86
4.1.4.5 免疫印迹策略鉴定86
4.1.5 同位素稀释质谱 Bt 蛋白标准物质定值策略探讨86
4.1.6 Bt 蛋白标准物质的定值86-87
4.1.7 Bt 蛋白标准物质的均匀性评价87-90
4.1.7.1 均匀性检验策略87-88
4.1.7.2 均匀性检验结果88-90
4.1.8 Bt 蛋白标准物质的稳定性评价90-91
4.1.9 标准物质定值结果的溯源性91-92
4.1.10 定值结果的不确定度评价92-95
4.2 CryIAb 和 CryIAc 酶切肽段标准物质的研制95-125
4.2.1 肽段标准物质研制技术路线95
4.2.2 肽段标准物质候选物的确定及其性质95-96
4.2.3 肽段标准物质的制备96
4.2.4 肽段标准物质参考值的测定96-106
4.2.4.1 肽段标准物质纯度的测定96
4.2.4.2 肽段标准物质纯度的中无机成分的测定96-102
4.2.4.3 肽段标准物质分子量的测定102-106
4.2.5 同位素稀释质谱肽段标准物质定值策略探讨106-109
4.2.5.1 肽段标准物质的定值106-109
4.2.6 肽段标准物质的均匀性评价109-114
4.2.6.1 均匀性检验策略109-110
4.2.6.2 均匀性检验结果110-114
4.2.7 肽段标准物质的稳定性评价114-118
4.2.8 肽段标准物质定值结果的溯源性118-119
4.2.9 定值结果的不确定度评价119-125
第五章 结论125-127
参考文献127-131
致谢131-132
探讨成果及发表的学术论文132-133
发表及己接受的论文132-133
作者及导师介绍133-134
附件134-135
转基因植物蛋白,Bt蛋白,量值溯源传递,物质,同位素稀释质谱法,ELISA方法,
更新时间：2024-02-16
作者：用户投稿
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